| Реактив Эллмана | |
|---|---|
 | |
| Общие | |
| Систематическое наименование |
5-(3-карбокси-4-нитрофенил)дисульфанил-2-нитробензойная кислота |
| Сокращения | ДТНБ; DTNB |
| Традиционные названия | Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота) |
| Хим. формула | C14H8N2O8S2 |
| Физические свойства | |
| Молярная масса | 396,34 г/моль |
| Термические свойства | |
| Т. кип. | 240 - 245 °C |
| Классификация | |
| Рег. номер CAS | 69-78-3 |
| PubChem | 6254 |
| Рег. номер EINECS | 200-714-4 |
| SMILES | |
| InChI | |
| ChEBI | 86228 |
| ChemSpider | 6018 |
| Безопасность | |
| R-фразы | R36, R37, R38 |
| S-фразы | S26, S36 |
| H-фразы | H315, H319, H335 |
| P-фразы | P261, P305, P338, P351 |
| Приводятся данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иного. | |
Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ)[1] — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[2]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году[3].
Приготовление
В оригинальной статье Эллмана[2] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окислив их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.
Тест Эллмана
При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.
Реакция ДНТБ с тиолом (R-SH).
Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определятся при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[4][5], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[5]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[3]. Следует отметить, что коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[5].
Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион, при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови[6].
Примечания
- ↑ 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) at Sigma-Aldrich
- 1 2 Ellman GL (1959). “Tissue sulfhydryl groups”. Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70—7. DOI:10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID 13650640.
- 1 2 Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). “Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine”. Anal Bioanal Chem. 373 (4—5): 266—76. DOI:10.1007/s00216-002-1347-2. PMID 12110978.
- ↑ Collier HB (1973). “Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate”. Anal. Biochem. 56 (1): 310—1. DOI:10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID 4764694.
- 1 2 3 Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). “Reassessment of Ellman's reagent”. Meth. Enzymol. Methods in Enzymology. 91: 49—60. DOI:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597.
- ↑ Sedlak J, Lindsay RH (1968). “Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent”. Anal. Biochem. 25 (1): 192—205. DOI:10.1016/0003-2697(68)90092-4. PMID 4973948.
Внешние ссылки
- Quantitation of sulfhydryls DTNB, Ellman’s reagent (с неправильным коэффициентом поглощения)
Данная страница на сайте WikiSort.ru содержит текст со страницы сайта "Википедия".
Если Вы хотите её отредактировать, то можете сделать это на странице редактирования в Википедии.
Если сделанные Вами правки не будут кем-нибудь удалены, то через несколько дней они появятся на сайте WikiSort.ru .