WikiSort.ru - Не сортированное

ПОИСК ПО САЙТУ | о проекте
Реактив Эллмана
Общие
Систематическое
наименование
5-(3-карбокси-4-нитрофенил)дисульфанил-2-нитробензойная кислота
Сокращения ДТНБ; DTNB
Традиционные названия Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота)
Хим. формула C14H8N2O8S2
Физические свойства
Молярная масса 396,34 г/моль
Термические свойства
Т. кип. 240 - 245 °C
Классификация
Рег. номер CAS 69-78-3
PubChem
Рег. номер EINECS 200-714-4
SMILES
InChI
ChEBI 86228
ChemSpider
Безопасность
R-фразы R36, R37, R38
S-фразы S26, S36
H-фразы H315, H319, H335
P-фразы P261, P305, P338, P351
Приводятся данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иного.

Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ)[1] — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[2]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году[3].

Приготовление

В оригинальной статье Эллмана[2] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окислив их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.

Тест Эллмана

При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.

Реакция ДНТБ с тиолом (R-SH).





Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определятся при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[4][5], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[5]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[3]. Следует отметить, что коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[5].

Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион, при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови[6].

Примечания

  1. 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) at Sigma-Aldrich
  2. 1 2 Ellman GL (1959). “Tissue sulfhydryl groups”. Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70—7. DOI:10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID 13650640.
  3. 1 2 Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). “Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine”. Anal Bioanal Chem. 373 (4—5): 266—76. DOI:10.1007/s00216-002-1347-2. PMID 12110978.
  4. Collier HB (1973). “Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate”. Anal. Biochem. 56 (1): 310—1. DOI:10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID 4764694.
  5. 1 2 3 Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). “Reassessment of Ellman's reagent”. Meth. Enzymol. Methods in Enzymology. 91: 49—60. DOI:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597.
  6. Sedlak J, Lindsay RH (1968). “Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent”. Anal. Biochem. 25 (1): 192—205. DOI:10.1016/0003-2697(68)90092-4. PMID 4973948.

Внешние ссылки

Данная страница на сайте WikiSort.ru содержит текст со страницы сайта "Википедия".

Если Вы хотите её отредактировать, то можете сделать это на странице редактирования в Википедии.

Если сделанные Вами правки не будут кем-нибудь удалены, то через несколько дней они появятся на сайте WikiSort.ru .




Текст в блоке "Читать" взят с сайта "Википедия" и доступен по лицензии Creative Commons Attribution-ShareAlike; в отдельных случаях могут действовать дополнительные условия.

Другой контент может иметь иную лицензию. Перед использованием материалов сайта WikiSort.ru внимательно изучите правила лицензирования конкретных элементов наполнения сайта.

2019-2025
WikiSort.ru - проект по пересортировке и дополнению контента Википедии