Жёлтый флуоресцентный белок (англ. Yellow Fluorescent Protein) — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка (GFP), выделенного из медузы эквореи Aequorea victoria. Характеризуется максимумом поглощения при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP, таких как синий, циановый и др[1].
Применение для FRET
Спектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции CFP (англ. Cyan Fluorescent Protein), поэтому эти два флюорофора используются для создания биосенсоров, в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии (FRET). Такие сенсоры используются для выявления определённых событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов.
Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена [2]:
- белок, являющийся носителем сенсора (это может быть практически любой белок);
- флюорофор CFP;
- домен, меняющий свою структуру в ответ на определенное воздействие (например, фосфорилирование);
- флюорофор YFP.
При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP (например, 440 нм — почти не возбуждает YFP, но сильно возбуждает CFP), можно наблюдать флуоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает (в зависимости от того, на какое расстояние флюорофоры были отдалены друг от друга). В результате интенсивность флуоресценции CFP возрастает, а YFP — падает. Таким образом, по отношению флуоресценции YFP к флуоресценции CFP можно количественно оценить изменение конформации биосенсора.
Примечания
- ↑ Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. (2012). “Qa-SNAREs localized to the trans-Golgi network regulate multiple transport pathways and extracellular disease resistance in plants”. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (5): 1784—9. DOI:10.1073/pnas.1115146109. PMC 3277133. PMID 22307646.
- ↑ Access : Midzone activation of aurora B in anaphase produces an intracellular phosphorylation gradient : Nature
См.также
Библиография
- Miyawaki A, Llopis J, Heim R; et al. (August 1997). “Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin”. Nature. 388 (6645): 882—7. DOI:10.1038/42264. PMID 9278050. Используется устаревший параметр
|month=(справка)
Ссылки
Данная страница на сайте WikiSort.ru содержит текст со страницы сайта "Википедия".
Если Вы хотите её отредактировать, то можете сделать это на странице редактирования в Википедии.
Если сделанные Вами правки не будут кем-нибудь удалены, то через несколько дней они появятся на сайте WikiSort.ru .