| Taq-полимераза | |
|---|---|
 Taq-полимераза в комплексе с ДНК | |
| Обозначения | |
| Символы | polA |
| PDB | 1BGX |
| UniProt | P19821 |
| Другие данные | |
| Шифр КФ | 2.7.7.7 |
Taq-полимераза, или термостабильная ДНК-полимераза I — термостабильная ДНК-зависимая-ДНК-полимераза бактерии Thermus aquaticus. Taq-полимераза является гомологом ДНК-полимеразы I Escherichia coli[1]. В отличие от E. coli, Th. aquaticus является термофильным микроорганизмом (для его жизнедеятельности оптимальна температура окружающей среды 55 °С и выше), поэтому и его ферменты термостабильны (температурный оптимум составляет 70—80 °С)[2]. Taq-полимераза обладает ДНК-полимеразной и 5',3'-экзонуклеазной активностями и применяется для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Taq-полимераза была впервые охарактеризована в 1976 году[3]. Этот фермент состоит из 832 аминокислотных остатков и имеет молекулярную массу около 94 кДа[4].
Свойства
Ключевым свойством Taq-полимеразы, которое делает её удобной для ПЦР, является термостабильность. Период полужизни фермента при температуре 92,5 °C составляет 130 минут, что позволяет проводить многочисленные циклы ПЦР без необходимости добавлять новую порцию фермента в каждом цикле (как делали до открытия термостабильных ДНК-полимераз). Кроме того, более высокий температурный оптимум протекания реакции амплификации уменьшает вероятность образования вторичной и третичной структуры в матрице и неспецифичного отжига праймеров[2].
Скорость работы фермента зависит от температуры и составляет примерно 60 нуклеотидов в секунду при 72 °С. Это выше, чем скорость работы фрагмента Клёнова при оптимальной для него температуре и частично объясняется тем, что Taq-полимераза не имеет корректирующей 3',5'-экзонуклеазной активности, которая замедляет работу фермента. Taq-полимераза имеет более высокую процессивность, чем фрагмент Клёнова и легко синтезирует фрагменты ДНК длиной 4000 нуклеотидных остатков, а при оптимальных условиях — до 8000—10 000[2].
Полимераза может добавлять 3'-выступающий нуклеотид на тупые концы ДНК-фрагмента. Это свойство фермента используется для молекулярного клонирования[2].
Примечания
- ↑ Eom S. H., Wang J., Steitz T. A. Structure of Taq polymerase with DNA at the polymerase active site // Nature. — 1996. — Т. 382, вып. 6588. — С. 278—281. — PMID 8717047.
- 1 2 3 4 Elizabeth van Pelt-Verkuil, Alex van Belkum, John P. Hays. Chapter 7. Taq and Other Thermostable DNA Polymerases // Principles and Technical Aspects of PCR Amplification. — Springer, 2008. — ISBN 978-1-4020-6240-7.
- ↑ Chien A., Edgar D. B., Trela J. M. Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus // J Bacteriol. — 1976. — Т. 127, вып. 3. — С. 1550—1557. — PMID 8432.
- ↑ Taq-полимераза в базе данных UniProt. Проверено 29 апреля 2013. Архивировано 17 мая 2013 года.
Данная страница на сайте WikiSort.ru содержит текст со страницы сайта "Википедия".
Если Вы хотите её отредактировать, то можете сделать это на странице редактирования в Википедии.
Если сделанные Вами правки не будут кем-нибудь удалены, то через несколько дней они появятся на сайте WikiSort.ru .