Среда LB (англ. Lysogeny broth) — богатая среда для роста культур бактерий. Аббревиатура LB часто неверно расшифровывается как Luria broth, Lennox broth, или Среда Luria-Bertani. Согласно автору прописи среды, Джузеппе Бертани, сокращение LB означает англ. lysogeny broth — лизогенная среда.[1] Состав среды LB впервые опубликован в 1951 году в статье Бертани по лизогении. В этой статье описано выделение фагов энтеробактерий P1, P2 и P3 в разработанной им среде для оптимального роста Shigella и образования бляшек фагов.[1][2]
Среда LB стала стандартом для выращивания культур Escherichia coli с 1950-х годов.[3][4][5][6][7] Среду LB широко используют в молекулярной микробиологии для выделения плазмидной ДНК и рекомбинантных белков. Среда остается наиболее часто используемой для выращивания рекомбинантных штаммов Escherichia coli.[8] Использование среды LB для исследований в области физиологии ограничено.[9]
Состав
Описано несколько составов среды LB. Они имеют сходный состав и содержат:
- пептиды и пептоны казеина
- витамины, в том числе витамины группы В
- микроэлементы (азот, сера, магний)
Источником пептидов и пептонов является триптон. Витамины и микроэлементы содержатся в экстракте дрожжей. Ионы натрия, необходимые для транспорта и осмотического баланса, добавляют в состав среды в виде хлорида натрия. Триптон также является источником незаменимых аминокислот.
В оригинальной статье 1951 года Бертани использовал 10 граммов NaCl и 1 грамм глюкозы на 1 литр среды; Лурия в среде «L broth» 1957 года полностью скопировал среду Бертани.[6] Последующие прописи не содержат глюкозу.
Прописи среды LB отличаются количеством добавляемого хлорида натрия, что позволяет создать условия для выращивания разных штаммов бактерий. Среды с низкой концентрацией солей, Lennox LB и Luria LB используют для выращивания культур с соле-чувствительными антибиотиками.[10]
- LB-Miller (10 г/л NaCl)
- LB-Lennox (5 г/л NaCl)
- LB-Luria (0,5 г/л NaCl)
Приготовление
Общий способ приготовления 1 литра сред:
- Взвесить:
- Растворить в 800 мл дистиллированной или деионизованной воды
- Довести до точного объема 1 л в мерном цилиндре.
- Автоклавировать при 121 ° C в течение 20 минут
- После охлаждения перемешать колбу, чтобы перемешать компоненты среды.
pH среды
Перед автоклавированием некоторые исследователи доводят рН среды до 7,5 или 8 раствором гидроксида натрия. Однако гидроксид натрия не обладает какими-то буферными свойствами, поэтому рН среды резко изменяется при размножении бактерий. Для поддержания определенного значения рН некоторые исследователи доводят рН до требуемого 5-10 мМ раствором Трис с заданным pH (хотя использование буфера при такой концентрации не может обеспечить поддержания заданного рН при размножении бактерий). В большинстве случаев точный рН среды не требуется.
Примечания
- 1 2 Bertani G. Lysogeny at mid-twentieth century: P1, P2, and other experimental systems. (англ.) // Journal of bacteriology. — 2004. — Vol. 186, no. 3. — P. 595—600. — PMID 14729683.
- ↑ Bertani, G. (1951). Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli. J. Bacteriol. 62:293-300. PMID 14888646 PDF
- ↑ Miller, J. H. (1972). Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
- ↑ Luria, S. E., J. N. Adams, and R. C. Ting. (1960). Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology. 12:348-390. PMID 13764402
- ↑ Lennox, E. S. (1955). Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1. Virology. 1:190-206. PMID 13267987
- 1 2 Luria, S. E., and J. W. Burrous. (1957). Hybridization between Escherichia coli and Shigella. J. Bacteriol. 74:461-476. PMID 13475269 PDF
- ↑ Anderson, E. H. (1946). Growth requirement of virus-resistant mutants of Escherichia coli strain B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 32:120-128. PMID 16588724
- ↑ Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis. (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
- ↑ Nikaido, H. (2009). The Limitations of LB Medium. Small things considered — The Microbe Blog. ASM. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html
- ↑ Commonly used bacterial E.coli growth media. — Expression Technologies Inc. http://www.exptec.com/Reagents/Common%20Media.htm
Данная страница на сайте WikiSort.ru содержит текст со страницы сайта "Википедия".
Если Вы хотите её отредактировать, то можете сделать это на странице редактирования в Википедии.
Если сделанные Вами правки не будут кем-нибудь удалены, то через несколько дней они появятся на сайте WikiSort.ru .